тема «ВИЧ/СПИД-13» - Отчет фгбу «гнц институт иммунологии»

тема «ВИЧ/СПИД-13»


Проведено исследование иммуногенных свойств смеси синтетических пептидов, копирующих эпитопы ВИЧ1 (V1-, V2-, V3 - петлю белка gp120 консенсусной последовательности группы М и V3 - петлю белка gp120 российского изолята), с пептидогликаном клеточной стенки бактерии E. coli. Введение препарата стимулировало выработку специфических антител класса IgG и IgM. Для сравнительного анализа иммунного ответа на синтетические пептиды с иммунным ответом, образующимся в результате естественной инфекции, собраны образцы сывороток людей, содержащих антитела к ВИЧ. Проведено исследование нейтрализующей активности ВИЧ - положительных сывороток на модели псевдовирусной инфекции.
Исследовано 11 пептидных препаратов, 10 из которых имитируют вариабельность поверхностных эпитопов V3-петли вируса ВИЧ-1, один является нашим оригинальным проектом и представляет собой минимальный мультимер потенциального конформационного эпитопа нейтрализации в линейном синтетическом пептиде. При иммунизации лабораторных животных (инбредных мышей) только пептидами после одно- или двукратной иммунизации титры антител в сыворотке не поднимались выше фона неиммунизированных мышей. Добавление к пептидным антигенам в качестве адъювантов препаратов пептидогликанов из клеточной стенки бактерий Salmonella typhi (как рецептор-направленных адъювантов) позволяет получить анти-пептидные антитела в титрах: после однократной иммунизации порядка - 102, после двукратной – (2 – 5) х 102.
Проведен анализ данных научной литературы о современных биомедицинских подходах к иммунопрофилактике и иммунотерапии ВИЧ-инфекции/СПИДа. Проанализированы международные нормативные документы по противодействию ВИЧ-инфекции/СПИДу, в том числе последние рекомендации ВОЗ о раннем начале антиретровирусной терапии. Подготовлен аналитический обзор «Биомедицинские подходы к иммунопрофилактике и иммунотерапии ВИЧ-инфекции/СПИДа». Подготовлен вопросник для анкетирования потенциальных добровольцев с целью оценки информированности о ВИЧ/СПИДе и готовности к участию в клинических испытаниях анти-ВИЧ/СПИД-вакцин и вакцинации против ВИЧ/СПИДа. Подготовлен проект «Методики проведения анкетирования для оценки информированности потенциальных добровольцев о ВИЧ/СПИДе и готовности к вакцинации против ВИЧ/СПИДа». Подготовлен проект методических рекомендаций «Принципы обследования и отбора потенциальных добровольцев для участия в клинических испытаниях профилактических кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИДа».
тема «Иммунопатология»
Выявлено, что среди иммунологических отклонений, зарегистрированных у детей первого года жизни с тимомегалией, наиболее постоянно проявляется Т-лимфопения с преобладающим снижением содержания CD4+-лимфоцитов и уровня Т-рецепторных эксцизионных колец (ТРЭК) в лимфоцитах. Выраженность этих изменений увеличивается с нарастанием степени тимомегалии. Менее закономерно выявляется снижение содержания регуляторных CD4+CD25hi-Т-клеток и эндогенно активированных CD4+CD25lo Т-клеток. Снижение содержания ТРЭК при тимомегалии в периферических Т-клетках указывает на ослабление эмиграции зрелых Т-клеток из органа, что может способствовать проявлению несостоятельности иммунной защиты. Поэтому детей с увеличением тимуса можно рассматривать как группу риска, предрасположенную к возникновению более частых заболеваний.
Отработана экспериментальная модель метастазирующего рака 4Т1 на мышах, определена динамика роста опухоли, динамика нарастания супрессорных популяций MDSC и T reg в селезенке и легких, динамика появления метастазов в легких. Показана пригодность данной модели для исследования возможности и эффективности фармакологической коррекции иммунитета у экспериментальных животных как при росте солидной опухоли, так и при метастатической болезни, а также для анализа возможности преодоления иммуносупрессии, связанной с опухолевым процессом.
Сформирована группа из 26 пациентов с бронхиальной астмой средней и тяжелой степени тяжести, длительно получающих глюкокортикоиды и произведен забор крови в фазе обострения. Купирование обострения бронхиальной астмы сопровождалось увеличением показателей бронхиальной проходимости, достоверным увеличением объема форсированного выдоха, а также существенным повышением пролиферативного ответа лимфоцитов на митоген. У больных БА, длительно получавших ГКС-терапию, имеется стойкое снижение чувствительности ЛПК к действию глюкокортикостероидов.
С помощью разработанной анкеты опрошено 750 респондентов молодого возраста (1990-1995 годов рождения). Респондентам, которые дали положительные ответы было проведено аллергообследование с помощью постановки кожных тестов со стандартным набором диагностических аллергенов и проведена спирометрия для выявления бронхообструкции. Установлено, что за последние 2 десятилетия (по сравнению с данными 1992 г) возросла распространенность аллергического ринита (с 17% до 59%), крапивницы (с 13% до 35%), пищевой аллергии (с 1,8% до 48%) и лекарственной непереносимости (с 5,4% до 29%). Отмечен рост сенсибилизации к эпидермальным аллергенам и аллергенам клещей домашней пыли.
Выявлено 16 человек с различными видами врожденных иммунодефицитов. Для подтверждения диагноза проведено молекулярно- генетическое обследование трех больных. В настоящее время под наблюдением состоит 395 пациентов с первичными иммунодефицитами взрослого возраста. Проведено изучение особенностей течения беременности у пациенток с иммунодефицитными состояниями. Разработан алгоритм ведения беременности, родов и послеродового периода у пациенток с иммунодефицитами. Обоснована необходимость включения аллерголога-иммунолога в стандарты ведения пациенток, получающих иммуносупрессивную терапию во время беременности.
Проведено комплексное клинико-иммунологическое и аллергологическое обследование больных, перенесших в анамнезе реакции гиперчувствительности после введения рентгеноконтрастных средств (РКС) с различными клиническими проявлениями. У 48 человек из 87 (55,2%) были выявлены различные аллергические заболевания. Определена специфичность и чувствительность кожного тестирования для диагностики лекарственной аллергии РКС. Разработан протокол обследования пациентов с предполагаемой аллергией на РКС.
Проведено комплексное клинико-аллергологическое обследование и лечение 35 пациентов с астматической триадой (АсТ). При аллергообследовании установлен высокий процент непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов (100%), природных салицилатов и продуктов, консервированных с помощью ацетилсалициловой кислоты (5,4%), сенсибилизация к неинфекционным и грибковым аллергенам (54,2%). Выявлена дисфункция мукозального иммунитета у больных с АсТ проявляющиеся в виде повышения содержания IgG и лактоферрина, а также снижения активности лизоцима. Комплексную фармакотерапию ПРС проводили с применением препарата Лонгидазы. Показано, что применение препарата способствует снижению и нормализации показателей уровня лактоферрина, что свидетельствует о его противовоспалительном и иммуномодулирующем эффекте.
Обследовано 18 пациентов с атопическим дерматитом (АтД) различной степени тяжести (10 женщин и 8 мужчин), в возрасте от 18 до 47 лет. Проведена сравнительная оценка экспрессии генов цитокинов в биоптатах кожи. Выявлено увеличение уровня экспрессии генов IL5, IL10, IL25 и TGFβ в группе больных АтД по сравнению со здоровыми донорами (p <0, 005). Статистически значимых различий по признакам IL4, IL 13, IL 17, IL 32, IL33, IL 35, выявлено не было. Показана целесообразность исследования экспрессии генов цитокинов в качестве маркеров иммунного ответа непосредственно в органе мишени аллергического воспаления – коже при АтД.
Исследованы in vivo адъювантные эффекты шигеллезной вакцины, представляющей собой низкотоксичный экзополисахарид, содержащий 2 остатка липида, полученный из S.sonnei 5063. В опытах ex vivo у здоровых доноров выявлены индивидуальные различия в активации адаптивного иммунитета, при этом шигеллезная вакцина в подавляющем большинстве случаев активировала «аларминовое» и ТLR-зависимое звенья врожденного иммунитета. Исследуемый препарат определял направление дифференцировки предшественников регуляторных T-клеток и активировал преимущественно ТН1/провоспалительный иммунный ответ. Совокупность представленных результатов позволяет рассматривать исследуемый препарат как бифункциональный иммунотропный агент, обладающий иммуностимулирующей активностью.
В течение 2013 г. года регистр пополнился 8-ю наблюдениями вновь выявленных пациентов (детей) с первичной иммунной недостаточностью, включая 2-х пациентов СНIgA, 2-х с ХКСК, 1-го с гипер-IgE, 1-го с КИН с атаксией-телеангиэктазией, 1-го с транзиторной гипогамаглобулинемией младенческого возраста и 1-го с агаммаглобулинемией с гипер-IgM. Данные клинико-иммунологического обследования подтвердили диагноз первичных иммунодефицитов. Общее число пациентов, внесенных в регистр достигло 649.

Контракты с ФМБА


По отраслевому заказу

«Объект-13»


Обследовано 197 лиц из персонала предприятия и лиц, проживающих в г. Красноармейске. 90 человек обследовано повторно. Наличие аллергопатологии отмечено у 19,19% лиц 1 группы - персонала, имеющего возможный контакт с производственным фактором (ПФ), у 22,73% лиц 2 группы- лиц, не имеющих допуска для работы с ПФ, и у 16,36% лиц 3 группы – группы контроля, которую составили жители г. Красноармейска. В структуре отмечено преобладание аллергического ринита с бытовой сенсибилизацией, а также поллиноза с преимущественной сенсибилизацией к аллергенам злаковых трав. Оказана консультативная и лечебная помощь. Разработаны и применены обучающие программы для пациентов по наиболее распространенным аллергическим заболеваниям и ИДС. Для изучения показателей мукозального иммунитета исследованы образцы слюны. Выявлен повышенный уровень общего IgG в слюне у персонала предприятия с заболеваниями нижних отделов респираторного тракта и заболеваниями ЖКТ и повышенный уровень sIgA у лиц с частыми ОРВИ, заболеваниями верхних отделов респираторного тракта и ротовой полости.

«Аллергодиагностика-13»


Получены и охарактеризованы пищевые аллергены: куриного яйца (цельного), рыбы (треска), яблока и моркови. Выделены и охарактеризованы аллергены из пыльцы амброзии, полыни, березы и тимофеевки. Показана специфическая активность полученных аллергенных препаратов. Выполнены эксперименты по изучению влияния на иммунную систему мышей комбинаций бактериального липополисахарида (комплексный ЛПС P. аeruginosa) и мурамилпептида из клеточной стенки E. сoli (штамм М-17) с пищевыми аллергенами, при пероральном введении. Разработана лабораторная технологии выделения аллергенов из плодовых тел гриба Шиитаке. Выделенные аллергены охарактеризованы в электрофорезе в ПААГ. Показано увеличение синтеза ИЛ-4 лимфоидными клетками здоровых доноров под воздействием белковых фракций из плодовых тел гриба Шиитаке.
В рамках ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации 2009-2014 годы»

«Стандарт-12»


Разработана новая модификация методики оценки дегрануляции NK-клеток с использованием антител к CD107a с меткой PC5 (вместо FITC, использованной ранее), что позволило повысить чувствительность метода. Разработана новая модификация методики оценки экспрессии внутриклеточного перфорина и CD107a в NK-клетках, особенностью которой является введение внутреннего стандарта, представляющего собой мононуклеарные клетки здоровых доноров, меченные флюоресцентным красителем CFSE. Получены нормативные показатели для дегрануляции NK-клеток, экспрессии CD107a и перфорина.

«Гепатит-12»


Синтезированы молекулы миРНК, обладающие противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С (HCV). Установлено, что наибольшей ингибирующей активностью обладает препарат siUTR280, который наравне с контрольным препаратом siLuc снижает люциферазную активность и содержание РНК HCV в клетках гепатомы человека Huh-7, несущих полноразмерный репликон HCV. Созданы соответствующие вспомогательные вещества для транспорта миРНК в клетку, в том числе: фуллерены, катионные пептиды, липосомы и лентивирусные векторы. На основе полученных веществ и молекул миРНК, разработаны и синтезированы биомолекулярные комплексы с противовирусным эффектом. Проведена оценка эффективности транспорта биомолекулярных комплексов через плазматическую мембрану клетки. Проведена оценка токсичности биомолекулярных комплексов на основе катионных пептидов и липосом. Отработана модель для оценки трансфекционной активности siRNA в комплексе со средствами доставки различной природы и показана принципиальная возможность создания препаратов на основе siRNA для подавления репликации HCV.

«Антропоген -13»


Монография посвящена комлексной методологии оценки риска развития нарушений иммунной системы при действии антропогенных факторов. Монография состоит из 6 глав. В главе 1 представлен анализ данных об отрицательном действии различных химических, физических, биологических и других факторов окружающей среды, в результате которого выявлены характерные изменения в иммунном статусе под действием каждого из рассмотренных антропогенных факторов. В главе 2 описана методология проведения иммуномониторинга с последующим её применением при массовом обследовании 12000 человек в различных регионах. Глава 3 посвящена анализу полученных результатов с использованием различных математических подходов. В главе 4 представлены материалы по созданию системы прогнозирования развития ИДС. Глава 5 посвящена анализу применения различных подходов к проведению иммуномониторинга. Глава 6 – Заключение. Подготовлен авторский макет монографии.

«Иммунитет-13»


Монография посвящена анализу функционирования клеток врождённого иммунитета в норме и при воздействии различных антропогенных факторов. Монография включает следующие главы: вводную, в которой изложены основные закономерности функционирования врожденной иммунной системы и принципы ее ответа на неблагоприятные факторы антропогенной природы. Глава 1 посвящена рецепторному аппарату клеток врождённого иммунитета и его изменениям под влиянием антропогенных факторов. В главе 2 рассматривается роль цитокинов врождённого иммунитета и их изменений под влиянием антропогенных факторов. Глава 3 посвящена клеточным факторам врождённого иммунитета и их изменениям под влиянием антропогенных факторов. В главе 4 рассмотрено учение об аларминах. Проведена компоновка материала, редакторская правка, оформление иллюстраций. Подготовлен авторский макет монографии.

«Иммуногенетика-13»


Монография посвящена проблеме изучения роли иммуногенетики человека в обеспечении биобезопасности государства и включает следующие главы: 1 Введение в иммуногенетику; 2 Геномика и протеомика генов иммунного ответа; 3 Эпидемиологические аспекты противоинфекционной защиты и полиморфизм генов иммунного ответа; 4 Трансплантация органов и тканей человека, полиморфизм HLA и биологическая безопасность; 5 HLA полиморфизм и репродукция; 6 "Новые" гены иммунного ответа человека и заболевания; 7 Иммуногенетика сахарного диабета 1 типа; 8 Создание отечественной платформы (оборудование, реагенты) для развития фундаментальных и прикладных исследований в области иммуногенетики человека; 9 Иммуногенетика в биомедицине: этапы развития и перспективы. Проведены систематизация и обобщение литературных данных. Проведена компоновка материала, редакторская правка. Подготовлен авторский макет монографии.
В рамках ЦПИ «Медико-биологическое и медико-санитарное обеспечение спортсменов сборных команд Российской Федерации на 2011-2013 годы»
(заказчик ФГУП «НИИГПЭЧ» ФМБА России)

«Поиск-2-ИИ»


Проведены доклинические исследования перспективных иммуномодулирующих средств на основе мурамилпептидов клеточной стенки бактерий кишечной палочки (ПеКСИМ-1) и полисахаридов из гриба Шиитаке (ПГШ-1). Подготовлены материалы для регистрационного досье перспективных иммуномодулирующих средств ПеКСИМ-1 и ПГШ-1, а именно: - описание и схема технологического процесса; - лабораторный регламент; - фармакопейная статья;- аналитический паспорт;- аналитические методики контроля качества; - данные по условиям хранения, включая описание первичной упаковки, проект инструкции по применению. Подготовлены акты производства двух опытных партий перспективных иммуномодулирующих средств ПеКСИМ-1 в объеме 2000 доз и ПГШ-1 в объеме 1000 доз.
В рамках ФЦП «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» (заказчик Минобрнауки России, Минпромторг России) – 6 тем

«Доклинические исследования лекарственного средства – профилактической вакцины против гемофильной инфекции»


Сконструирован комплексный лекарственный препарат, состоящий из капсульного полисахарида (КПС) и липоолигосахарида (ЛОС) H.influenzae, который представляет собой мицеллы, в состав которых входят оба антигена, которые в соотношении 1:1 обеспечивают препарату требуемые иммунобиологические свойства. Проведены доклинические исследования вакцины (иммуногенность, иммунобиологическая безопасность, острая и хроническая токсичность).

«Доклинические исследования лекарственного средства для комплексной терапии гепатита С на основе естественных и искусственных регуляторов иммунного ответа»


Проведены доклинические исследования полученного лекарственного средства на основе рекомбинантного белка ИПФIII и полиоксидония (эмбриотоксическое и тератогенное действие в антенатальном периоде развития потомства, мутагенное действие на клетки костного мозга млекопитающих в тесте Эймса, исследование хронической токсичности, иммунотоксические и аллергизующее действие). Подготовлен комплект документов на получение разрешения на клинические исследования лекарственного средства, включающий проект фармакопейной статьи лекарственного средства, протокол клинических исследований, проект брошюры исследователя. Разработаны рекомендации по использованию лекарственного средства, опытно-промышленный регламент получения и проект инструкции по применению лекарственного средства.

«Доклинические исследования лекарственного средства пролонгированного действия на основе рекомбинантного аналога полноразмерного паратиреоидного гормона для лечения остеопороза»


Проведены доклинические исследования лекарственного средства на основе рекомбинантного аналога полноразмерного паратиреоидного гормона для лечения остеопороза. Показана зависимость периода полувыведения лекарственного средства от способа введения и от вида животных. Установлена низкая острая токсичность и отсутствие хронической токсичности, низкое иммунотоксическое действие, отсутствие аллергизующего действия лекарственного средства. Разработана экспресс-методика и проведено изучение биологической активности лекарственного средства по уровню цАМФ, фосфолипазы С и протеинкиназы С на клеточных линиях. Подана заявка на патент «Способ получения лекарственного средства пролонгированного действия на основе рекомбинантного аналога полноразмерного паратиреоидного гормона для лечения остеопороза», рег. № 2013150663 от 14.11.13.

«Доклинические исследования лекарственного средства на основе механизма интерференции РНК для терапии бронхиальной астмы»


Разработаны методики для опытно-промышленного регламента (ОПР): количественного определения лизин-транспортного пептида (ЛТП) и примесей, подлинности пептида ЛТП как компонента лекарственного средства, подлинности РНК-олигонуклеотида как компонента лекарственного средства, подлинности комплекса РНК-олигонуклеотида/ЛТП как компонента лекарственного средства. Проведена наработка РНК-олигонуклеотидов, ЛТП и оптимизирован способ получения комплекса РНК-олигонуклеотида с ЛТП (миРНК/ЛТП). Разработаны методики анализа комплекса миРНК/ЛТП и лабораторный регламент получения лекарственного средства.

«Доклинические исследования лекарственного средства - комбинированной профилактической вакцины против шигеллезной инфекции»


Оптимизирована лабораторно-экспериментальная технология получения фармацевтической субстанции (ФС) на основе капсульного полисахарида бактерий Зонне и модифицированного липополисахарида бактерий Флекснера. Разработан лабораторный регламент получения ФС. Наработаны опытные образцы ФС и проведен сравнительный анализ физико-химических свойств и подлинности (3 серии). Произведена закладка опытных образцов ФС на хранение для исследования стабильности и определения условий хранения и срока годности. Начаты доклинические исследования. Осуществлено изучение специфической активности ФС на моделях in vitro и in vivo. Исследован эффект межмолекулярной антигенной конкуренции при иммунизации ФС. Изучена иммуногенность (серологический профиль иммунного ответа) ФС. Проведен сравнительный анализ иммуногенности ФС с моновариантами составляющих компонентов. Показано, что способность ФС индуцировать образование антител не уступает такой способности моновариантов.

«Доклиническое исследование лекарственных средств для специфической иммунотерапии аллергии»

(заказчик Минпромторг России)

Проведены доклинические исследования аллерготропинов «Птерпол» и «Фарпол» для лечения аллергии, вызываемой клещами домашней пыли. Оба аллерготропина являются безопасными препаратами, не вызывающими у животных токсических реакций при длительном введении в эквивалентной максимальной терапевтической дозе. В сравнении с исходным аллергеном, аллерготропины являются препаратами со сниженными аллергенными свойствами по критерию стимуляции синтеза гомоцитотропных антител (специфических IgE) и обладают повышенными иммуногенными свойствами. Проведенные исследования дают основание рекомендовать аллерготропины «Птерпол» и «Фарпол» для проведения первой фазы клинических испытаний. Подготовлены проекты опытно-промышленных регламентов. Разработаны проекты документов для проведения первой фазы клинических испытаний. Подана заявка на патент "Аллерготропины для лечения аллергии, вызываемой клещами домашней пыли" № 2013138134 от 15.08.2013.

«Доклинические исследования лекарственного средства на основе комплекса мурамилпептидов пептидогликана клеточной стенки грамм-отрицательных бактерий для профилактики и лечения острых и хронических респираторных инфекций»


Подготовлен аналитический обзор информационных источников. Проведены патентные исследования. Разработаны методы анализа образцов субстанции лекарственного средства. Начата разработка лабораторной технологии получения лекарственного средства.

«Разработка экспериментальной модели атопического дерматита у мышей для изучения механизмов развития и эффективности новых подходов к терапии данного заболевания»


Разработана экспериментальная модель АД (атопического дерматита). На разработанной модели АД проведена оценка эффективности АСИТ. По совокупности иммунологических, патофизиологических, клинических и гистологических изменений в результате проведения АСИТ модифицированным сОА аллергеном, можно сделать вывод о том, что мономерный аллергоид (сОА) является перспективным препаратом для терапии атопического дерматита. В качестве одного из перспективных терапевтических подходов к АСИТ, предложено применять блокаду экспрессии генов цитокинов, вовлеченных в патогенез заболевания, используя метод РНК-интерференции, где ключевым моментом является доставка молекул РНК в клетки. В качестве альтернативных невирусных векторов показано применять разнообразные поликатионные соединения, способные образовывать комплексы с отрицательно заряженными нуклеиновыми кислотами (НК) и конденсировать их в компактные наноструктуры. Созданы липопептидные и фуллереновые конструкции, способные образовывать комплексы с НК. Кроме того, удалось синтезировать нетоксичное химическое соединение липопептидной природы, способное эффективно осуществлять адресную доставку плазмидной ДНК в различные органы млекопитающих. Разработанная пептидная конструкция способствует проникновению трансгена преимущественно в ткань селезенки.

«Гомеостатические процессы в популяции Т-лимфоцитов, вызванные лимфопенией. Анализ механизмов и предпосылок развития иммунопатологии»


Исследование влияния цитостатических препаратов на развитие Т-лимфопении и последующее изучение гомеостатических процессов при восстановлении Т-клеток проводили на периферической крови пациентов с впервые выявленной множественной миеломой до начала лечения и через 4 и 30 дней после окончания курса химиотерапии. При изначальном Т-лимфоцитозе на 4 сутки после окончания курса химиотерапии наблюдается Т-лимфопения, а к 30 суткам - восстановление до уровня здоровых доноров. Динамика изменения более выражена у CD8+ Т-клеток по сравнению с CD4+ Т-клетками.
Восстановление регуляторных Т-клеток в два раза превышающих количество у здоровых людей после лимфопении характеризовалось снижением числа CD4+FOXP3+ клеток на 4 сутки после окончания курса химиотерапии и достижением уровня здоровых доноров на 30 сутки после лечения.

«Лимфоцитарный фосфатазо-ассоциированный протеин (LPAP) как новая сигнальная молекула»


Изучали фосфорилированные изоформы белка LPAP человека. Выявлено несколько сайтов фосфорилирования белка LPAP. Для определения конкретных сайтов фосфорилирования были испытаны мутанты белка LPAP, в которых определенные сериновые, треониновые и тирозиновые остатки были замещены на нейтральную аминокислоту аланин, которая не подвержена фосфорилированию. Полученные мутантные варианты гена LPAP были трансфецированы в клетки 293Т. Окрашивание иммунопреципитатов LPAP показало, что мутации в сайте Thr113/Tyr115, а также Ser153 приводили к падению в два раза интенсивности окрашивания LPAP красителем Pro-Q, и, следовательно, фосфорилирование белка LPAP проходит по этим сайтам. Обе индивидуальные мутации как в положении Thr113, так и Tyr115 приводили к уменьшению фосфорилирования. Сделан вывод о том, что одна из этих мутаций приводит к исчезновению сайта фосфорилирования, а другая к изменению пептидного мотива, который узнает соответствующая киназа.

«Изучение молекулярного состава вирусных биопленок на поверхности Т-лимфоцитов человека и их роли в межклеточной передаче вирусов HTLV-1 и ВИЧ-1»


Получены два моноклональных антитела, распознающих антиген на поверхности клеток C91/PL и колокализующихся с белком Gag вируса HTLV-1. Дается характеристика полученным антителам и их идентификация с помощью метода иммунопреципитации и последующей масс-спектрометрии. Проведена повторная иммунизация мышей биопленками вируса HTLV-1, полученных элюированием с клеток C91/PL. Это позволит расширить панель моноклональных антител к вирусным биопленкам и более полно охарактеризовать компоненты биопленок. Проведена иммунизация мышей Т-клеточной линией человека MT2, также продуцирующей вирус HTLV-1 и образующей вирусные биопленки. Модифицирован метод скрининга моноклональных антител, полученных к биопленкам и клеткам, продуцирующим вирус HTLV-1. Получены 3 гибридомных линии секретирующих моноклональные антитела против клеток MT2, которые дают окраску клеток, колокализующуюся с местоположением вирусного корового белка p19 и не реагирующих с клетками СЕМ. Полученные гибридомные культуры клонированы и подготовлены для скрининга.

"Роль вирусологического синапса и транспорта макромолекул в межклеточной трансмиссии и репликации ВИЧ-1"


Осуществлен успешный дизайн, сборка и тестирование in vivo генетических конструкций для нок-аута рецепторов и корецепторов ВИЧ-1 (CD4, CXCR4 и CCR5) в Т клетках человека с помощью нуклеаз «цинковые пальцы» и Cas9. Получено большинство из донорских векторов, кодирующих различные части генома ВИЧ-1 и репортер inGFPt и предназначенные для таргетной интеграции их в геном клетки. Полученные первые клоны Т клеток с интегрированной ДНК ВИЧ-1, лишенной гена env, проверены методами генетического анализа и в инфекционном тесте. Путем последовательных трансфекций и клонирований будут получены конечные трансгенные Т клетки – продуценты ВИЧ-1 и Т клетки – мишени.

«Изучение иммуностимулирующих свойств и иммуногенности мурамилпептидов грамотрицательных бактерий»


Наработаны мурамилпептиды грамотрицательных бактерий ГМтри, ГМтетра и диГМтетра в количестве, необходимом для последующих экспериментов. Получены полноразмерные кДНК рецепторов NOD1, NOD2, TLR2, TLR4, CD14, которые участвуют или могут участвовать в распознавании мурамилпептидов грамотрицательных бактерий. Перечисленные кДНК клонированы в экспрессионный вектор pcDNA3.1, полученные экспрессионные плазмиды наработаны в препаративных количествах. Отработана методика трансфекции клеток репортерной плазмидой, содержащей ген люциферазы под контролем NF-kB-индуцибельного промотера. Получена клеточная линия HEK293-Luc, со стабильно встроенной в геном конструкцией «NF-kB-индуцибельный промотер — люцифераза». Показано, что интерлейкин-1 альфа и бета костимулируют выработку провоспалительных цитокинов ФНО и ИЛ-12 дендритными клетками, а также выработку ФНО макрофагами. 4 Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат
Реферат